羥基磷灰石是一種由鈣和磷酸鹽組成的生物材料，具有良好的生物相容性和生物活性，尤其制成的層析介質(zhì)具有分離效率高，選擇性、靈敏度高，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，在生物分子領(lǐng)域的分離純化領(lǐng)域得到了廣泛的認(rèn)同。

分離純化原理

羥基磷灰石層析介質(zhì)具有獨(dú)特的分離純化原理，它同時(shí)具有陽(yáng)離子交換作用和金屬螯合作用。它的晶體結(jié)構(gòu)中的磷酸根離子可以與帶正電的蛋白質(zhì)結(jié)合，表現(xiàn)出陽(yáng)離子交換特性，可通過(guò)改變NaCl濃度來(lái)進(jìn)行洗脫；而鈣離子則與蛋白質(zhì)上的自由羧基以金屬螯合的方式結(jié)合，表現(xiàn)出金屬螯合特性，可通過(guò)改變磷酸鹽濃度進(jìn)行洗脫。因此該層析介質(zhì)既可以用磷酸鈉單梯度洗脫，也可以采用NaCl梯度洗脫后以低濃度磷酸鈉緩沖液平衡，再以磷酸鈉濃度梯度洗脫的雙梯度洗脫模型，以達(dá)到更好的去除雜質(zhì)效果。

羥基磷灰石層析介質(zhì)特性

羥基磷灰石因陶瓷化工藝不同分為2種類(lèi)型：I型和II型。

I型是小孔徑對(duì)蛋白質(zhì)具有更大的保留，對(duì)酸性蛋白質(zhì)有更大的動(dòng)態(tài)載量，主要純化大部分蛋白質(zhì)。

II型是大孔徑對(duì)抗體、核酸等大分子有更大的保留，動(dòng)態(tài)載量更高，因此更適合純化抗體和核酸。

羥基磷灰石層析介質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)：

• 高動(dòng)態(tài)載量、高流速、高產(chǎn)率；

• 更好的化學(xué)穩(wěn)定性和機(jī)械強(qiáng)度，更長(zhǎng)的壽命；

• 剛性結(jié)構(gòu)，保證了其在PH>6.5的范圍內(nèi)使用，可用NaOH清洗；

• 良好的批次重現(xiàn)性，容易放大化；

• 可隨意選用陽(yáng)離子和金屬螯合兩個(gè)模式分離純化蛋白或者其他分子。

羥基磷灰石層析介質(zhì)的應(yīng)用

1、在單克隆抗體純化中的應(yīng)用

單克隆抗體的純化中用羥基磷灰石層析介質(zhì)，可通過(guò)磷酸鹽梯度捕獲目標(biāo)抗體，通過(guò)非磷酸鹽體系（如氯化鈉）梯度洗脫，精準(zhǔn)地去除抗體聚集體、脫落的Protein A、內(nèi)毒素等雜質(zhì)，確保最終產(chǎn)品的純度和收率。

2、在核酸純化中的應(yīng)用

羥基磷灰石層析介質(zhì)可通過(guò)C位點(diǎn)與核酸上的磷酸基團(tuán)作用，可直接用于純化mRNA。不同于傳統(tǒng)的陰離子交換層析介質(zhì)，mRNA在羥基磷灰石層析介質(zhì)上的保留時(shí)間隨著mRNA堿基數(shù)的增加而增加，因此該層析介質(zhì)對(duì)不同長(zhǎng)短的核酸具有更好的分辨率。

3、在疫苗純化中的應(yīng)用

多糖類(lèi)疫苗生產(chǎn)中的雜質(zhì)主要是宿主細(xì)胞蛋白(HCP)、宿主細(xì)胞 DNA、色素和其他多糖類(lèi)物質(zhì)，羥基磷灰石層析介質(zhì)可以特異的吸附HCP以及DNA等，從而提高多糖疫苗的純度。 

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